Magyar Nőorvosok Lapja, 2000 (63. évfolyam, 1-6. szám)
2000 / 2. szám - BAKTERIOLÓGIA - Dósa Erika - Urbán Edit - Földes Márta - Török László - Kalmár László - Nagy Erzsébet: Az Affirm VPIII DNA hibridizációs teszt alkalmazása a női urogenitális traktus kórokozóinak vizsgálatában
Magyar Nőorvosok Lapja 63 (2) 2000. bően, automatikusan reagáltatja, 32 perc 34 mp alatt. A műszer egyidejűleg hat minta vizsgálatára alkalmas. A pozitív eredményt a golyócskák kék színűre változása jelöli (2. ábra). A teszt érzékenységét úgy alakították ki, hogy negatív eredményt kapunk, ha kórokozók csíraszáma alacsonyabb a mintavevő tamponon, mint a2x105 G. vaginalis, a1x101 Candida sp., 1 5x105 T. vaginalis esetében. Pozitív eredmény várható, ha a vizsgálati anyagmintában a kórokozók csíraszáma eléri, vagy magasabb a fenti csíraszámnál. A kit által megadott pozitivitás határértékeket saját vizsgálatainkkal is kontrolláltuk. Bakteriális vaginózis pozitív kontrolljaként egy bakteriális vaginózis tüneteire utaló asszony hüvelyváladékának általunk előzetesen kitenyésztett vegyes anaerob tenyészetét alkalmazták. A hüvelyváladékból az anaerob tenyésztés során G. vaginalis és vegyes anaerob flóra (Mobilluncus sp. Prevotella sp., Bacteroides sp., I. táblázat 196 hüvelyváladék összehasonlító vizsgálatának eredményei Porphyromonas sp. Peptostreptococcus sp.) tenyésztett. Az agar lemez felületén a fenti kórokozók 105 csíraszámban tenyésztek. Az Affirm VPIII teszttel a minta erős pozitivitást mutatott. A Candida sp. kontrollálására C. albicans ATCC 14053 törzs 104/ml tenyészetét alkalmazták. Az Affirm VPIII teszttel a minta erős pozitivitást mutatott. A 107 ml élőcsíraszámú T. vaginalis tenyészet 100p-nyi mennyiségével átitatott tamponos mintája, amely a T. vaginalis 100 csíraszámát jelenti tamponon, az Affirm VPIII teszttel pozitív eredményt adott. Eredmények Az I. táblázatban láthatóak a kenetvizsgálat, a tenyésztés és a DNS hibridizációs teszttel kapott eredmények. A teszt a bakteriális vaginózis diagnosztikáját elsősorban a G. vaginalis jelenlétére alapozza. A bakteriális vaginózis kórképre - a vegyes anaerob flóra - a jellemző: Mobillincus sp., Prevotella sp., Bacteroides sp., Porphyromonas sp., Peptoszeptococcus sp., Mycoplasma hominis törzsek magas csíraszámú együttes jelenléte a G. vaginalis mellett. Vizsgálataink során 31 esetben az anaerob tenyésztés és az Affirm teszt BV is pozitív eredményt adott. A minta az Affirm teszttel gyengén pozitívnak bizonyult G. vaginalis-ra. Ebben a két esetben az anaerob tenyésztés során G. vaginalis nem tenyészett azonban nagy csíraszámban egyéb anaerob kórokozó: Mobilluncus sp., Prevotella melaninogenica, Bacteroides fragilis, Peptostreptococcus micros került identifikálására. Ezekben az esetekben a gyenge pozitivitás oka lehet, hogy az Affirm VPIII a M. mulieris 4x107 ml és a Bifidobacterium dentium 8x107ml csíraszáma esetén egy nem specifikus G. vaginalis pozitív eredményt ad. (BBL kit tájékoztató) Az Affirm VPIII Candida sp pozitív eredményeket a Sabouraud-agar lemezen történt tenyésztés mind a 22 esetben igazolta. A Gram szerint festett kenetben csak 20 esetben voltak sarjadzó gomba elemek láthatók. Az Affirm VPIII Candida sp. keresztreakció révén pozitív eredményt mutat a Cryptococcus neoformans 1x107ml csíraszáma esetén. A Cryptococcus neoformans előfordulása vulvoginitisben elenyésző, vizsgálati anyagmintáinkból nem izoláltuk ezt a kórokozót. Vizsgálataink során az Affirm VPIII teszttel 10 esetben kaptunk Trichomonas vaginalis pozitív eredményt, míg tenyésztéssel 12 alkalommal. Ezt az egyezési arányt magyarázhatja a kontrollként elvégzett, korábban említett vizsgálat eredménye. + A/0I1,imi_14 v \SJ \ */ SZÍNEZŐ Яг' SZÍNTELEN CÉLSZEKVENCIA MIKROPARTIKULÁHOZ KÖTÖTT KOMPLEMENTER SZEKVENCIA SZÍNEZŐ RÉSZECSKE KÉK POZITÍV SZÍNEZŐ RÉSZECSKÉK EREDMÉNY SZUUSZIUÁI M Jw KÖTŐDÉSE A HIBRIDHEZ ENZIM KONJUGÁTUM 7. ábra A DNS hibiridzáción alapuló teszt elve о о ^ Trichomonas ® Gardnentta I'M' Candida Qja/f«chr .О V 2. ábra Gardienella vaginalis és Candida sp. pozitív gén próba eredeti „РАС" card-ja Pozitív esetek száma Affirm VPIII Gram kenet Tenyésztés Bakteriális vaginózis 31 31 29 Candida sp. 22 20 22 Trichomonas vaginalis 10 12 BV+Candida sp. 7 7 7