Magyar Állatorvosok Lapja, 1986 (41. évfolyam, 1-12. szám)
1986 / 6. szám - Cseh Sándor - Bilton, Roger John - Bényei Balázs: A juhembrió-átültetés eddigi eredményei az üllői embriológiai állomáson
330 MAGYAR ÁLLATORVOSOK LAPJA 1986. JUNIUS mes 1500—2000 I. E. PMSG (Folligon ad us. vet., Intervet) intramuskulär ein. Die Gewinnung von Embryonen erfolgte chirurgisch am 4.-5.-6- Tag nach der Brunst. Bei einem Teil der vorbereiteten Empfängertiere wurde Chronogest ad us. vet. zur Zyklussvnchronisierung eingesetzt. Die Embryotransplantation erfolgte chirurgisch. Unter den Donortieren wiesen Merinoschafe eine wesentlich deutlichere Antwortreaktion (Gelbkörperzahl, Embryozahl) als Suffolk-Schafe auf (Tab. !.). Der Entwicklungsgrad des Embryos (Tab. 2) und die Zahl der transplantierten Embryos (Tab. 3.) waren ohne nennenswerten Einfluß auf den Erfolg der Embryotransplantation. Es war kein wesentlicher Unterschied im Befruchtungserfolg zwischen den Empfängertieren mit, und solchen ohne Zyklussynchronisierung festzustellen (Tab. 4). Von den über 600 tiefgekühlten, aus Australien importierten Embryonen überlebten 57%, und von den frischen Embryonen 62% (Tab. 5 und в). Az első embrióátültetést juhban és kecskében Warwick és Berry 1933-ban végezte (9). A módszert Hunter és mtsai továbbfejlesztették, és az általuk kidolgozott eljárásról 1955-ben részletes leírást közöltek (5). A jelenleg használatos sebészi embriókinyerést Moore és Shelton ismertette 1962—64-ben (6a, 6b). Az Állattenyésztő Közös Vállalat üllői embriológiai állomásán 1982-ben kezdődött a juhembrióátültetés technikájának adaptálása. Ekkor fogadtuk az első import juhembrió-szállítmányt, és a programot megelőzően a külföldi partner — tanfolyam keretében — megismertetett bennünket a juhembrió-átültetés módszerével (4). Ezekre az ismeretekre támaszkodva kezdtük el a kísérleti átültetéseket, majd azt követően — szolgáltatásképpen — a gazdaságok igényeihez igazodva, a tenyésztési célokat szolgáló programokat. Természetesen folyamatosan fogadjuk az import juhembrió-szállítmányokat is. Jelen közleményünk célja kettős: egyrészt az általunk alkalmazott módszer bemutatása, másrészt az állomás többéves munkája eredményeinek és tapasztalatainak ismertetése. beültetésig az embriók 25% juhszérumot tartalmazó friss PBS-oldatban 38 °C-on voltak (1). A kísérletbe több, mint ezer német feketefejű és magyar fésűsmerinó fajtájú anyajuhot vontunk be. A recipiensek előkészítése, tartása, takarmányozása, a nemi ciklus megfigyelésének módja a korábbi közleményünkben leírtaknak megfelelően történt (4). A recipiensek egy részénél a nemi ciklust hüvelyszivaccsal szinkronizáltuk. A recipiensek ivarzásmegfigyelése — nem szinkronizált csoportok esetében — az átültetési program megkezdése előtt kb. 1,5 hónappal elkezdődött. Ebben az esetben csak a két szabályos, megfigyelt ciklussal rendelkező recipienseket használtak fel embrióátültetéshez. Az embriók beültetése — sebészi úton — a recipiensek ivarzását követő 4—5—6. napon történt. A műtétet — helyi érzéstelenítés mellett — median laparotomiával végeztük, azaz a méhet a linea alba mentén készített seben keresztül emeltük ki. A méhszarvakat a petefészekkel együtt óvatosan a seb nyílásába emelve ellenőriztük a petefészken lévő ciklusképleteket, majd a zygotákat a sárgatesttel azonos oldali(ipsilateralis) méhszarvba ültettük be. Адрес авторов: Authors’ address: Adresse der Verfasser: Allateny. Közös Vállalat Embriológiai Központ Üllő 2225 Saját vizsgálatok Anyag és módszer A donorok nemi ciklusát progeszteronnal impregnált hüvelyszivaccsal (Chronogest ad us. vet., Intervet) szinkronizálták. Két nappal a szivacs eltávolítása előtt 1500—2000 NE PMSG-t (Folligon ad us. vet.; Intervet) adtunk im. Ivarzáskor a superovulaltatott anyajuhoknál laparoszkópiás termékenyítést alkalmaztunk (3). Az embriók kinyerését — helyi érzéstelenítés mellett, sebészi úton — az űződést követő 4—5—6. napon kíséreltük meg. A sebet a has középvonalában készítettük, a méhet kiemeltük, majd a petevezető petefészek felőli végébe műanyag katétert vezettünk. Az öblítőfolyadékot a bifurcatiónál — fecskendő segítségével — juttattuk a méh lumenébe, majd a petevezető irányába masszíroztuk. A méhszarvakat külön-külön 20—40 ml 10% borjúsavó tartalmú Dulbecco-féle foszfát-puffer oldattal öblítettük át. A petevezetőből kiáramló folyadékot a műanyag katéter közvetítésével üvegedényben fogtuk fel és termosztátban 37—38 ° C-on ülepítettük. Ülepítés után kikerestük az embriókat, morfológiai jellemzőik alapján osztályozták és beültetésig 38 ° C-on tárolták. A külföldi partner kiváló genetikai tulajdonságokkal bíró szülőpároktól származó, a ciklus 6. napján kinyert, majd mélyhűtött embriókat szállított. Mélyhűtéskor az embriók 25% juhszérummal és 1,4 M glicerinnel kiegészített Dulbecco-féle foszfát-puffer oldatba kerültek. A mélyhűtés —6 °C-ig 1 °C/perc sebességgel történt, majd a hűtési sebességet 0,3 °C/perc-re csökkentve folytatódott —35 °C-ig. Erről a hőmérsékletről az embriókat tartalmazó üvegampullák közvetlenül folyékony nitrogénbe kerültek. A felmelegítést követően, a krioprotektív anyag fokozatos kivonása — hat lépés — után. Eredmények és megbeszélés A különböző fajták superovulatiós kezelésre adott reakcióit az 1. táblázatban foglaltuk össze. A merinó fajtájú donorok — az irodalmi adatoknak megfelelően — lényegesen magasabb válaszreakciót (ovulatiós ráta, hasznos embriószám) adtak ugyanakkora hormonadagra, mint a Suffolk fajtájúak. Bár több szerző ennél nagyobb reakciókról számolt be más készítmények (pl. FSH) alkalmazása után (4—8 oltás, 12—24 mg összmennyiségben), mi gyakorlatiasabb megoldásnak tartjuk az egyszeri PMSG-oltást (2, 7, 8, 10). Az ovulatiós válaszreakcióban tapasztalható csökkenést ellensúlyozza az, hogy üzemi körülmények között könnyebben oldható meg az állatok megbízható superovulatiós kezelése. Az embriók fejlettségi stádiuma az embriótúlélést lényegesen nem befolyásolta (2. táblázat). A ciklus 4—5—6. napján kinyert, különböző korú embriók megtapadási készsége hasonló volt. 1. táblázat A különböző fajták superovulatiós kezelésre adott reakciója Donoron-Donoron-Donorok fajtája száma Átlagos sárgatest - szám Átlagosan kinyert embriók számaként kinyert, átültethető embriókként és mosásonként nyert vemhek száma száma Merinó 12 8,6 7,17 3,1 Suffolk 12 6,8 5,5 4,5 2,3