Magyar Állatorvosok Lapja, 1986 (41. évfolyam, 1-12. szám)

1986 / 6. szám - Cseh Sándor - Bilton, Roger John - Bényei Balázs: A juhembrió-átültetés eddigi eredményei az üllői embriológiai állomáson

330 MAGYAR ÁLLATORVOSOK LAPJA 1986. JUNIUS mes 1500—2000 I. E. PMSG (Folligon ad us. vet., Intervet) intramuskulär ein. Die Gewinnung von Embryonen erfolgte chirurgisch am 4.-5.-6- Tag nach der Brunst. Bei einem Teil der vorbereiteten Empfängertiere wurde Chronogest ad us. vet. zur Zyklus­­svnchronisierung eingesetzt. Die Embryotransplantation erfolgte chirurgisch. Unter den Donortieren wiesen Merinoschafe eine wesentlich deutlichere Antwortreaktion (Gelb­­körperzahl, Embryozahl) als Suffolk-Schafe auf (Tab. !.). Der Entwicklungsgrad des Embryos (Tab. 2) und die Zahl der transplantierten Embryos (Tab. 3.) waren ohne nennenswerten Einfluß auf den Erfolg der Embryotransplantation. Es war kein wesentlicher Unterschied im Befruchtungserfolg zwischen den Empfängertieren mit, und solchen ohne Zyklussynchronisierung festzustellen (Tab. 4). Von den über 600 tiefgekühlten, aus Australien importierten Embryonen überlebten 57%, und von den frischen Embryonen 62% (Tab. 5 und в). Az első embrióátültetést juhban és kecskében Warwick és Berry 1933-ban végezte (9). A módszert Hunter és mtsai továbbfejlesztették, és az általuk kidolgozott eljárásról 1955-ben részletes leírást közöltek (5). A jelenleg használatos sebészi embrió­kinyerést Moore és Shelton ismertette 1962—64-ben (6a, 6b). Az Állattenyésztő Közös Vállalat üllői embrioló­giai állomásán 1982-ben kezdődött a juhembrió­­átültetés technikájának adaptálása. Ekkor fogad­tuk az első import juhembrió-szállítmányt, és a programot megelőzően a külföldi partner — tanfo­lyam keretében — megismertetett bennünket a juhembrió-átültetés módszerével (4). Ezekre az ismeretekre támaszkodva kezdtük el a kísérleti átültetéseket, majd azt követően — szolgáltatás­képpen — a gazdaságok igényeihez igazodva, a tenyésztési célokat szolgáló programokat. Termé­szetesen folyamatosan fogadjuk az import juhem­­brió-szállítmányokat is. Jelen közleményünk célja kettős: egyrészt az általunk alkalmazott módszer bemutatása, más­részt az állomás többéves munkája eredményeinek és tapasztalatainak ismertetése. beültetésig az embriók 25% juhszérumot tartalmazó friss PBS-oldatban 38 °C-on voltak (1). A kísérletbe több, mint ezer német feketefejű és ma­gyar fésűsmerinó fajtájú anyajuhot vontunk be. A reci­­piensek előkészítése, tartása, takarmányozása, a nemi ciklus megfigyelésének módja a korábbi közleményünk­ben leírtaknak megfelelően történt (4). A recipiensek egy részénél a nemi ciklust hüvelyszi­vaccsal szinkronizáltuk. A recipiensek ivarzásmegfigye­­lése — nem szinkronizált csoportok esetében — az átül­tetési program megkezdése előtt kb. 1,5 hónappal elkez­dődött. Ebben az esetben csak a két szabályos, megfi­gyelt ciklussal rendelkező recipienseket használtak fel embrióátültetéshez. Az embriók beültetése — sebészi úton — a recipiensek ivarzását követő 4—5—6. napon történt. A műtétet — helyi érzéstelenítés mellett — median laparotomiával végeztük, azaz a méhet a linea alba mentén készített seben keresztül emeltük ki. A méhszarvakat a petefé­szekkel együtt óvatosan a seb nyílásába emelve ellenő­riztük a petefészken lévő ciklusképleteket, majd a zygo­­tákat a sárgatesttel azonos oldali(ipsilateralis) méhszarv­­ba ültettük be. Адрес авторов: Authors’ address: Adresse der Verfasser: Allateny. Közös Vállalat Embriológiai Központ Üllő 2225 Saját vizsgálatok Anyag és módszer A donorok nemi ciklusát progeszteronnal impregnált hüvelyszivaccsal (Chronogest ad us. vet., Intervet) szinkronizálták. Két nappal a szivacs eltávolítása előtt 1500—2000 NE PMSG-t (Folligon ad us. vet.; Intervet) adtunk im. Ivarzáskor a superovulaltatott anyajuhok­nál laparoszkópiás termékenyítést alkalmaztunk (3). Az embriók kinyerését — helyi érzéstelenítés mellett, sebészi úton — az űződést követő 4—5—6. napon kísé­reltük meg. A sebet a has középvonalában készítettük, a méhet kiemeltük, majd a petevezető petefészek felőli végébe műanyag katétert vezettünk. Az öblítőfolyadé­kot a bifurcatiónál — fecskendő segítségével — juttat­tuk a méh lumenébe, majd a petevezető irányába masszí­roztuk. A méhszarvakat külön-külön 20—40 ml 10% borjúsavó tartalmú Dulbecco-féle foszfát-puffer oldattal öblítettük át. A petevezetőből kiáramló folyadékot a műanyag katéter közvetítésével üvegedényben fogtuk fel és termosztátban 37—38 ° C-on ülepítettük. Ülepítés után kikerestük az embriókat, morfológiai jellemzőik alapján osztályozták és beültetésig 38 ° C-on tárolták. A külföldi partner kiváló genetikai tulajdonságokkal bíró szülőpároktól származó, a ciklus 6. napján kinyert, majd mélyhűtött embriókat szállított. Mélyhűtéskor az embriók 25% juhszérummal és 1,4 M glicerinnel kiegé­szített Dulbecco-féle foszfát-puffer oldatba kerültek. A mélyhűtés —6 °C-ig 1 °C/perc sebességgel történt, majd a hűtési sebességet 0,3 °C/perc-re csökkentve foly­tatódott —35 °C-ig. Erről a hőmérsékletről az embrió­kat tartalmazó üvegampullák közvetlenül folyékony nitrogénbe kerültek. A felmelegítést követően, a krio­­protektív anyag fokozatos kivonása — hat lépés — után. Eredmények és megbeszélés A különböző fajták superovulatiós kezelésre adott reakcióit az 1. táblázatban foglaltuk össze. A merinó fajtájú donorok — az irodalmi adatoknak megfelelően — lényegesen magasabb válaszreakciót (ovulatiós ráta, hasznos embriószám) adtak ugyan­akkora hormonadagra, mint a Suffolk fajtájúak. Bár több szerző ennél nagyobb reakciókról számolt be más készítmények (pl. FSH) alkalmazása után (4—8 oltás, 12—24 mg összmennyiségben), mi gya­korlatiasabb megoldásnak tartjuk az egyszeri PMSG-oltást (2, 7, 8, 10). Az ovulatiós válaszreak­cióban tapasztalható csökkenést ellensúlyozza az, hogy üzemi körülmények között könnyebben old­ható meg az állatok megbízható superovulatiós kezelése. Az embriók fejlettségi stádiuma az embriótúl­élést lényegesen nem befolyásolta (2. táblázat). A ciklus 4—5—6. napján kinyert, különböző korú embriók megtapadási készsége hasonló volt. 1. táblázat A különböző fajták superovulatiós kezelésre adott reakciója Donoron-Donoron-Donorok fajtája száma Átlagos sárgatest - szám Átlagosan kinyert embriók száma­ként kinyert, átültet­hető embriók­ként és mosáson­ként nyert vemhek száma száma Merinó 12 8,6 7,17 3,1 Suffolk 12 6,8 5,5 4,5 2,3

Next